①避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動,溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內(nèi)的填充狀況;柱壓突然升高或降低也會沖動柱內(nèi)填料,因此在調(diào)節(jié)流速時應(yīng)該緩慢進行,在閥進樣時的轉(zhuǎn)動不能過緩。
②應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成,特別是反相色譜中,不應(yīng)直接從有機溶劑改變?yōu)槿渴撬粗嗳弧?/div>
③一般說來色譜柱不能反沖,只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時,才可以反沖除去柱內(nèi)的雜質(zhì),否則反沖會迅速降低柱效。
④選擇使用適宜的流動相(尤其是pH),以避免固定相被破壞。有時可以在進樣器前面連接一預(yù)柱,分析柱是鍵合硅膠,預(yù)柱為硅膠,可使流動相在進入分析柱之前預(yù)先被硅膠"飽和",避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。
⑤避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱骨需要對樣品進行預(yù)處理或者在進樣器和色譜柱之間連接一保護柱.國產(chǎn)液相色譜柱一般是填有固定相的短柱.保護柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換。
⑥經(jīng)常用強溶劑沖洗色譜柱,清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì),在進行清洗時,對流路系統(tǒng)中流動相的置換應(yīng)以相混溶的溶劑逐漸過渡,每種流動相的體積應(yīng)是柱體積的20倍左右,即常規(guī)分析需要50-75ml。下面列舉一些色譜柱的清洗溶劑及順序,作為參考:正相硅膠柱以正已烷(或庚烷)、二氯甲烷(或氯仿)和甲醇依次沖洗,然后再以相反順序依次沖洗,所有溶劑都必;須嚴格脫水。甲醇能洗去殘留的強極性雜質(zhì),已烷使硅膠表面重新活化。
反相柱以水、甲醇、乙腈、一氯甲烷(或氯仿)依次沖洗,再以相反順序依次沖洗。如果下一步分析用的流動?相不含緩沖液,那么可以省略zui后一步用水沖洗。一氯甲烷能洗支殘留的非極性雜質(zhì)。四氫呋喃與乙腈或甲醇的混全溶液能除去類脂。有時也注射二甲亞砜數(shù)次。此外,用乙腈、丙酮和三氟醋酸(0.1%)梯度洗能除去蛋白質(zhì)污染。
陽離子交換柱可用稀酸緩沖液沖洗,陰離子交換柱可用稀堿緩沖液沖洗,除去交換性能強的鹽,然后用水、甲醇、水依次沖洗。
⑦保存色譜柱時應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇,柱接頭要擰緊,防止溶劑揮發(fā)干燥。禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置過夜或更長時間。
⑧國產(chǎn)液相色譜柱使用過程中,如果壓力升高,一種可能是燒結(jié)濾片被堵塞,這時應(yīng)更換濾片或?qū)⑵淙〕鲞M行清洗;另一種可能是大分子進入柱內(nèi),使柱頭被污染;如果柱效降低或色譜峰變形,則可能柱頭出現(xiàn)塌陷,死體積增大。